大巴車凌晨2點(diǎn)至5點(diǎn)在高速上必須休息。高速公路上，大巴車行駛時間過長會導(dǎo)致駕駛員疲勞，增加交通事故的風(fēng)險(xiǎn)。為了保障乘客和駕駛員的安全，相關(guān)規(guī)定強(qiáng)制要求大巴車在高速公路上必須進(jìn)行休息。

具體規(guī)定如下：

1、長途客運(yùn)車輛凌晨2時至5時停止運(yùn)行或?qū)嵭薪玉g運(yùn)輸，凌晨2點(diǎn)后禁止長途客車從收費(fèi)站口上高速，對此時間段內(nèi)正在高速公路上行駛的長途客車就近引導(dǎo)到服務(wù)區(qū)或客運(yùn)站停車休息。從事線路固定的機(jī)場、高鐵快線以及短途駁載且單程運(yùn)營里程在100公里以內(nèi)的客運(yùn)車輛，在確保安全的前提下，不受凌晨2時至5時通行限制。                   

2、駕駛員連續(xù)駕駛4小時后，必須停車休息至少30分鐘。

3、大巴車行駛8小時后，必須停車休息至少1小時。這個規(guī)定是為了防止駕駛員長時間連續(xù)駕駛導(dǎo)致疲勞駕駛，減少交通事故的發(fā)生。